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什么是色谱柱活化

来源:莱浦生物科技  2018-07-12

    我们可以将色谱柱按照色谱分离的模式将它分为多种类型,但是随着技术的发展,色谱柱类型也是不断地在改变的,很多新的柱型出现淘汰了一些以前过时的柱型。色谱柱活化就是一个对所测样品进行平衡的过程,不同的样品的测量次数也不一样。


    新的色谱柱活化,实际上是一个平衡的过程,除了用流动相平衡外,有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡,特别是测定分子量比较高的多肽,尤其重要。因为分子量高的物质分子,扩散速度慢,平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单,多进几次样品,直到峰面积和保留时间稳定,再进行正式进样测定。


    如果要加快平衡时间,把前面用来平衡的进样样品浓度加大,或者不等洗脱完成,连续进样多针。用待测物对新柱平衡,目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。


    另外提高分离度可从三个主要影响因素来考虑,柱效、选择性和保留因子。可通过减小填料粒径和增加色谱柱提高柱效;选择性和固定相选择以及pH条件有关,通过选择合适的色谱柱和合适的pH,可以提高选择性;有时候适当延长出峰时间增加保留因子,也可提高分离度。


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